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陽性菌菌體等電點較陰性菌為低，在相同PH條件下進行染色，陽性菌吸附堿性染料很多，因此不易脫去，陰性菌則相反。所以染色時的條件要嚴格控制。例如，在強堿的條件下進行染色，兩類菌吸附堿性染料都多，都可呈正反應；PH很低時，則可都呈負反應。此外，兩類菌的細胞壁等對結晶紫—石典復合物的通透性也不一致，陽性菌透性小，故不易被脫色，陰性菌透性大，易脫色。所以脫色時間，脫色方法也應嚴格控制。

　　革蘭氏染色法一般包括初染、媒染、脫色、復染等四個步驟，具體操作方法是：

　　１）涂片固定。

　?。玻┎菟徜@結晶紫染1分鐘。

　　３）自來水沖洗。

　　４）加石典液覆蓋涂面染1分鐘。

　?。担┧?，用吸水紙吸去水分。

　　６）加95%酒精數滴，并輕輕搖動進行脫色，30秒后水洗，吸去水分。

　?。罚┺t梁色液（?。┤?/span>10秒鐘后，自來水沖洗。干燥，鏡檢。

　　染色的結果，革蘭氏正反應菌體都呈紫色，負反應菌體都呈紅色。

ISO是標準化組織的英文縮寫，是由25個國家于1946年發起，1947年成立的由多國聯合組成的非政府機構。到目前為止，ISO有正式成員國120多個，我國是其中之一。