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方法編號：5022

1 適用范圍：適用于各類食品、原料和純凈水等樣品中大腸菌群的快速測定。

2 方法原理：將乳糖、顯色劑和選擇性培養基加載在紙片上，經培養后能夠在紙片上生長并發酵乳糖產酸的即為大腸菌群陽性，記錄每個稀釋度大腸菌群陽性紙片數，根據大腸菌群MPN表查出相應的大腸菌群數。

3方法特點：與國標法中的九管法相對應，將原來幾步的試驗簡化為一步，時間由78h縮短為24h以內，省去了制備培養基、消毒和培養器皿的清洗處理等大量輔助性工作，隨時可以打開包裝進行抽樣檢測。

4 操作方法

4.1樣品處理：無菌稱取樣品25g（或25mL）放入含有225mL滅菌生理鹽水的采樣瓶或均質杯中，經充分振搖做成1：10的樣品勻液，用1mL滅菌吸管吸取1：10樣品勻液，注入含有9mL滅菌生理鹽水的試管內，振搖試管制成1：100的稀釋液。以此類推，每個稀釋度更換一支滅菌吸管。

4.2接種：選取兩個稀釋度進行接種，普通食品一般采用1：10和1：100這兩個稀釋度，飲料和飲用水采用原液和1：10兩個稀釋度。每份由三片大紙片（接10mL）,六片小紙片（接1mL）組成,大片每小袋二張疊放算作一片。用滅菌吸管吸取10 mL 1：10稀釋液加到含有大紙片的塑料袋中（相當于接樣品1g），吸透后平放，做三個重復。再用1mL滅菌吸管吸取1 mL同一稀釋液涂布到含有小紙片的塑料袋中（相當于接樣品0.1g），做三個重復。再取一支1 mL滅菌吸管吸取1 mL 1：100稀釋液涂布到含有小紙片的塑料袋中（相當于接樣品0.01g），做三個重復。

4.3 培養：將接種好的紙片（可疊放）放入37°C培養箱中培養15h～24h。

5結果判斷與計數：若紙片變黃或在黃色背景上呈現紅色斑點為大腸菌群陽性紙片。紙片保持紫蘭色不變或在紫蘭色背景上呈現紅色斑點，但周圍沒有黃色均為大腸菌群陰性紙片。記錄每個稀釋度大腸菌群陽性紙片數，根據大腸菌群MPN表查出相應的大腸菌群數。如接種的*個稀釋度的稀釋液為原液，應將表上查出的結果除以10，以此類推。

6注意事項：如果樣品的酸堿度在pH7以下，應先用滅菌1mol/L氫氧化鈉（NaOH）調節溶液調至中性，避免因pH的原因導致的紙片變黃而影響結果觀察。

方法注解

1 檢測意義：大腸菌群是評價食品衛生質量的重要指標之一，目前已被廣泛應用于食品衛生工作中。大腸菌群多存在于溫血動物糞便、人類經常活動的場所以及有糞便污染的地方，大腸菌群數的高低，表明了食品及食品生產過程中受糞便污染的程度。大腸菌群計數紙片方法與傳統方法相比，節省了許多時間，省去了大量輔助性工作。

2 編寫說明

2.1目前，國外某一企業出品的大腸菌群計數紙片的檢測結果已與平板培養法相當，但產品售價相對較高。國內生產的此類產品在2007年經山東省疾病預防控制中心微生物所驗證時，如廣州天河綠洲生化研究中心的產品與平板法檢測結果的比率大約在90％左右，將其用于樣品中不得檢出大腸菌群的參數標準是可行的。在對樣品要求大腸菌群以cfu/mL.g（菌落形成單位）表述時，可參照菌落計數的方法進行。

2.2在一些實驗室中，使用國產大腸菌群檢測試劑盒的方法。中國疾病預防控制中心營養與食品安全所對天津諾凡公司出品的試劑盒與國標法進行了50份樣品的對比實驗，相關系數為r=0.992,p=0.000。兩種方法雖然都需要48h出結果，但試劑盒法具有易操作、省物力的優點。

3 國家標準檢驗方法檢索

1. GB 4789.3—2010食品安全國家標準-食品微生物學檢驗-大腸菌群計數