HPCE512系統(tǒng)基于多點檢測，克服了常規(guī)毛細管電泳（CE）存在的問題。與其它毛細管電泳系統(tǒng)相比，該儀器在定量、分辨率、靈敏度和重復(fù)性等方面均有較大的提高。這一顯著優(yōu)勢是通過比競爭系統(tǒng)收集更多的樣本數(shù)據(jù), 然后使用專用的信號處理算法來區(qū)分與分析物相關(guān)的信號和來自于背景的噪聲。

詳細介紹

HPCE512

---展示毛細管電泳的非凡潛力

高效毛細管電泳的重大進步

傳統(tǒng)CE系統(tǒng)的數(shù)據(jù)質(zhì)量往往很差。即使是相同的樣本，數(shù)據(jù)的重復(fù)性也很難達到要求。靈敏度被認為是不夠的，除非使用昂貴的、費時的標記技術(shù)，這些技術(shù)會對分析物的性質(zhì)產(chǎn)生不利的影響。HPCE512作為一種免標記系統(tǒng)，既可以減少分析成本，又可以解決常規(guī)CE的問題。

HPCE512以每秒10到15次的速度對512像素光電二極管陣列上的每個分析物帶進行成像，因此，每個分子帶(在這個例子中是蛋白質(zhì))的傳輸在時間和距離上可以被追蹤。

追蹤分析物的直線斜率取決于分子的特性（例如分子量、所選操作模式的電荷/質(zhì)量）

直線度表示分離條件的保真度，所有不同蛋白質(zhì)的軌跡可回到一個共同的注射點或頂點。

軟件可以識別出與任何頂點軌跡不一致（紅色顯示）的信號，并將其作為背景噪聲丟棄。

結(jié)果可以在背景干擾非常小的情況下對規(guī)定的峰進行明確地分析。

這種處理方式不需要使用標記化學(xué)品，可實現(xiàn)高分辨率、可量化和可重復(fù)的分析。

更好的數(shù)據(jù)結(jié)果分辨率、重復(fù)性和定量準確度

在HPCE512系統(tǒng)中使用的512像素光電二極管陣列檢測器，可以通過每次分析捕獲更大的數(shù)據(jù)量。

強大的信號處理算法可消除背景噪聲，使得每個組分都可以得到分離和量化。

氨基酸標準溶液(Sigma A 6407)的EVA處理數(shù)據(jù)

高分辨率數(shù)據(jù)

案例—核糖核酸酶B及其5種糖型分析

圖像顯示了這種糖蛋白的毛細管凝膠電泳，分辨率＜200Da（1 甘露糖=162Da），得到的數(shù)據(jù)結(jié)果可與一些形式的質(zhì)譜結(jié)果相媲美。

強大的數(shù)據(jù)處理算法可在小于200 道爾頓的分辨率下分析糖蛋白。

自診斷功能連續(xù)監(jiān)測毛細管和緩沖液條件

電滲流問題

熔融石英毛細管的表面存在硅羥基，這些硅羥基在常見電泳介質(zhì)的存在下被離子化并在見的pH條件下帶上負電荷，從而形成雙電層，該雙電層即使在電場和具有大量陽離子的可移動區(qū)域的影響下也不會移動。在這個致密層之外，是一個中性電解液的擴散層。

當電位差作用于毛細管時，可移動層中的陽離子向陰極方向遷移。離子在電解質(zhì)中被溶劑化，因此大量電解質(zhì)緩沖液也向陰極方向移動。這種流體的流動被稱為電滲流（EOF），如果不通過多點檢測進行監(jiān)控并通過毛細管調(diào)節(jié)進行控制，則會導(dǎo)致數(shù)據(jù)質(zhì)量下降，尤其是數(shù)據(jù)的重復(fù)性不好。

HPCE方法

多點檢測允許在其信號處理算法中將基于空間和距離的數(shù)據(jù)集生成為等相位圖。然后可以將其用于每次運行的檢查中，以查看毛細管中的條件是否已影響數(shù)據(jù)。通過觀察等相位圖中分析物譜帶或緩沖液成分的行為，可以監(jiān)控任何特定分離中的EOF。這樣可以優(yōu)化毛細管條件和其他參數(shù)（例如pH值、溫度、緩沖液等），從而在可重復(fù)性，分離度和定量方面產(chǎn)生明顯優(yōu)異的數(shù)據(jù)。