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1.裂解細胞提取總蛋白質,主要用于Western,免疫沉淀。
2.主要由NP-40、脫氧膽酸鈉、磷酸鈉、SDS、EDTA、蛋白酶抑制劑等。含有一支1.5ml PMSF。用本裂解液得到的蛋白樣品,可以用BCA蛋白定量試劑盒測定蛋白濃度。由于含有較高濃度的去垢劑,不能用Bradford法測定由本裂解液裂解得到樣品的蛋白濃度。
3.—20℃,12個月
使用方法:
對于組織樣品:
1.組織塊用冷PBS洗滌,去除血污。剪成小塊置于勻漿器中。
2.加入10倍組織體積本試劑(使用前數分鐘內加入蛋白酶抑制劑)使用高速組織研磨儀*勻漿。
3.將勻漿液轉移至1.5mL離心管中,振蕩。冰浴30 min,期間用移液器反復吹打,確保細胞*裂解。
4.12000g離心5 min,收集上清,即為總蛋白溶液。
對于培養細胞樣品:
1.對于貼壁細胞:
(1)用PBS沖洗細胞2-3次。后一次*吸干殘留液。
(2)加入適當體積的本試劑(使用前數分內加入蛋白酶抑制劑)于培養板、瓶內3-5 min。期間反復晃動培養板、瓶,使試劑與細胞充分接觸。
(3)用細胞刮刀將細胞及試劑刮下,收集到1.5mL離心管中。
2.對于懸浮細胞:離心收集細胞,每6孔板細胞加約250 μL本試劑(在使用前數分鐘內加入蛋白酶抑制劑),振蕩。
3.冰浴30 min,期間每10 min用200 μL移液器反復吹打數次,確保細胞*裂解。
4.12000g離心5 min,收集上清,即為總蛋白。
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