通過使用OlympusCKX53倒置顯微鏡拍攝的圖像，奧林巴斯細胞融合度檢查CKX-CCSW自動計算各種大小的培養容器中的細胞數量和融合百分比。
有*分析自體軟骨細胞培養的細胞生長特征
–融合度檢測軟件在細胞處理中的應用–

背景
穩定的細胞培養過程和對細胞生長特性的有x分析對于自體軟骨細胞植入和新的再s*物開發而言，是非常重要的兩個因素。這兩個因素均有與之相關的難題。實現穩定的培養過程需要用以預測細胞傳代*佳時間的準確、可重復的細胞融合信息。細胞生長特性分析的挑戰性在于用戶希望在不必培養大量細胞的情況下獲取準確的數據。奧林巴斯推出了CKX-CCSW軟件可以改s細胞培養過程并幫助解決這些問題。
CKX-CCSW融合度檢測器軟件
該軟件可與顯微鏡和數碼相機結合使用對活細胞融合度進行測量。快速、簡單的細胞計數程序以及高度準確且可重復的數據可以實現恒定條件下穩定且可預測的細胞培養。此外，無需破壞培養物即可測量培養物的數量和密度，從而將污染可能性降至*低。諸如倍增時間（DT）和群體倍增水平（PDL）等重要細胞生長數據可在不干擾細胞的情況下以*效且無損的方式獲得。
CKX41顯微鏡、DP27數碼相機和CKX-CCSW軟件。

CKX-CCSW融合度檢測軟件的效果
1.解決穩定自體軟骨細胞培養過程的難題
細胞傳代的時間通常依靠視覺進行評估，而這可能導致人為錯誤和造成傳代時間變化。CKX-CCSW軟件可提供培養皿中生長細胞的準確融合信息，因此用戶能夠在合適的時間進行細胞傳代。
2.解決有x獲取細胞生長特征分析數據的難題
CKX-CCSW融合度檢測軟件能夠提供準確、可重復的細胞生長數據，因此用戶可以安排細胞傳代時間，并減少培養過程中的庫存。


準確性驗證
為了評估CKX-CCSW軟件的性能，可將軟件計數的細胞數量與根據熒光染色圖像計算的細胞數量進行比較。聚焦顯微鏡是獲取準確生長曲線的重要因素，并且該軟件的聚焦指示器可產生準確的結果。該軟件的準確度估計為84–111％，表明該軟件能夠生成可靠的細胞生長曲線。

相襯圖像
熒光染色的細胞核圖像

在使用CKX-CCSW的情況下，即使細胞未染色，也可繪制與低密度到高密度細胞培養狀態下進行熒光觀察所獲得計數準確度相當的生長曲線。
結論
CKX41顯微鏡、DP27數碼顯微鏡相機和CKX-CCSW融合度檢測器軟件的結合讓用戶能夠在盡可能減少人為錯誤的同時準確估計細胞傳代的正確時間。該軟件無需更改細胞培養環境工作流程即可輕松獲取準確、可重復的細胞生長數據。
該項研究由日本醫學研究與發展局（AMED）和經濟產業省的“再s醫學產業化基本評估技術開發”計劃部分資助。樣品制備和圖像數據由OLYMPUS-RMS CORP提供。

誘導多能干（iPS）細胞，由于其潛在應用而繼續處于再s醫學和*物發現研究的*沿。針對研究目的維持、生長和準備iPS細胞的工作流程涉及許多過程。改進此類流程以提*效率和減輕細胞死亡對于推進所有干細胞相關研究均至關重要。干細胞研究雖然相對較新，但在很大程度上依賴于操作員的經驗和技能，這意味著人為錯誤在集落功效中起著重要作用。指示iPS細胞融合度是優化集落，分化和獲得可再現結果的有用工具。
iPS細胞研究示例


圖1.iPS細胞集落的圖像（左）和融合度測量結果（右）

在iPS細胞培養維持過程中使用奧林巴斯 CKX53組織培養顯微鏡獲得多個圖像，讓CKX-CCSW軟件能夠提供準確的融合度數據。在六天時間內，分別在6孔板的不同位置拍攝三張、六張和十張圖像。這些圖像被導入到CKX-CCSW軟件中，其中首先標出了細胞和背景（圖1）。
從這里開始，在整個圖像中以藍色和綠色顯示細胞和背景，并計算所有圖像的融合度。在使用三張、六張和十張圖像時，在第*天、第三天和第六天計算平均融合度和標準差。盡管所使用的圖像數量發生了顯著變化，但圖2顯示即使使用少量圖像也可以生成準確的生長曲線。

圖2.使用CKX-CCSW軟件記錄iPS細胞的集落變化、融合度

圖3.iPS細胞集落融合的生長曲線（集落的3張圖像）
所使用的設備和軟件：奧林巴斯 CKX53顯微鏡，DP22相機，CKX-CCSW軟件
物鏡：PLN2X（NA 0.06，WD 5.8 mm）觀察方法：明場
容器：6孔板
細胞：無滋y層的iPS細胞
由iPS PORTAL Inc.提供。
結論