上海信裕生物科技有限公司
主營產(chǎn)品: ELISA試劑盒,檢測試劑盒,白介素試劑盒,試劑盒,重組蛋白,單克隆抗體,多克隆抗體,細胞系,原代細胞,胎牛血清,生化試劑,實驗室耗材,abcam抗體等科研產(chǎn)品 |
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更新時間:2016-09-13 14:40:55瀏覽次數(shù):106
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人胸腺表達趨化因子檢測試劑盒生產(chǎn)廠家會提供對數(shù)坐標(biāo)紙,可直接手工繪制曲線;如果酶標(biāo)儀帶有分析軟件,可由軟件直接擬合曲線,并自動計算出樣本的濃度值;老式的酶標(biāo)儀只能打印出OD值,需要實驗員自己繪制曲線并計算,下面介紹2種繪制競爭法曲線的方法,希望對大家有幫助:
一、在對數(shù)坐標(biāo)紙上手工繪制曲線(Log-logit雙對數(shù)標(biāo)準(zhǔn)曲線)
1. 實驗做雙孔,實驗結(jié)果如下表所示。
標(biāo)準(zhǔn)點 濃度 OD1 OD2 OD均 結(jié)合率
S0 0 2.226 2.192 2.209
S1 0.1 1.725 1.679 1.702 77.0%
S2 0.4 1.313 1.338 1.3255 60.0%
S3 1.6 0.907 0.834 0.8705 39.4%
S4 6.4 0.517 0.517 0.517 23.4%
S5 25.6 0.230 0.244 0.237 10.7%
2)各標(biāo)準(zhǔn)點吸光值取均值。在表中OD均一列。
3)將S1~S5的OD均值與S0的OD均相除,為標(biāo)準(zhǔn)點的百分結(jié)合率。
4)在log-logit坐標(biāo)紙上繪圖。
5)坐標(biāo)紙上橫軸從左至右*個1-9表示為*個10進位,第二個1-9表示為第二個10進位。第三個1-9表示為第三個10進位。也就是說,如果*個1代表1ng/ml,則第二個1代表10ng/ml,第三個1代表100ng/ml。因為本次實驗標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍是從0.1ng/ml到25.6ng/ml,則可以用*個1代表0.1ng/ml,第二個1代表1ng/ml,第三個1代表10ng/ml。
6)坐標(biāo)紙縱軸為百分比。即各標(biāo)準(zhǔn)吸光值的百分結(jié)合率。
7)曲線*個數(shù)值點是(0.1,77.0%)。則在橫軸左起點的1處向上至70~80之間,由70向上7個小格處。
8)曲線第二個數(shù)值點是(0.4,60.0%)。則在橫軸左起*個4,向上至60的位置。
9)曲線第三個數(shù)值點是(1.6,39.4%)。則在橫軸左起第二個1至2之間,由第二個1向右6個小格。再向上至30~40之間,由30向上9個半小格處。
10)曲線第四個數(shù)值點是(6.4,23.4%)。則在橫軸左起第二個6至7之間,這里6與7之間分為5小格,則每個小格是0.2。所以由第二個6向右2個小格。再向上至20~30之間,由20向上約3個半小格處。
11)曲線第四個數(shù)值點是(25.6,10.7%)。則在橫軸左起第三個2至3之間,這里2與3之間分為10小格,則每個小格是1。所以由第三個2向右5個半小格。再向上至10~20之間,由10向上約半小格處。
12)畫一條通過各點的直線。要求盡可能多的點在線上,同時剩余的點均勻分布在直線的兩邊。
13)樣品也同樣由吸光值計算百分結(jié)合率,再從縱軸上的相應(yīng)結(jié)合率找到直線上的點,此點對應(yīng)的橫坐標(biāo)濃度即為樣品的濃度。無須換算。