Waters常規反相色譜柱安裝及使用維護指南

何謂常規反相色譜柱？

在硅膠或雜化基質顆粒上鍵合了如C18、C8、C4或苯基等鍵合相的色譜填料所裝填的色譜柱，按反相色譜條件進行操作和分離。反相是液相色譜中常使用的分離模式，而C18柱是常使用的反相色譜柱之一。

新色譜柱開啟和安裝的*步驟：

1. 使用新鮮潔凈的水與乙腈。沖洗系統，確保系統干凈，不含任何緩沖鹽和污染物。
2. 取用色譜柱時避免磕碰掉落。
3. 將色譜柱入口端連接到系統上，柱出口端先不要連接，色譜柱身上有箭頭標明正確流向。
4. 在0.1 mL/min流速條件下用純乙腈潤洗色譜柱，然后在2分鐘內將流速升至0.5 mL/min。
5. 當溶劑均勻的從柱出口端流出，停流速，將色譜柱出口端接到系統檢測器上（這樣可以避免氣泡進入檢測系統，并且可快速達到基線平衡）。
6. 重啟流速，按照步驟4的方法逐漸提高流速，至常規分析時所使用的流速。
7. 參考柱效測試報告中的方法，使用該流動相條件平衡色譜柱，通常需要使用5-10倍柱體積的流動相，直至壓力與基線穩定。
8. 測試柱效。如果沒有柱效測試報告中的分析物，請聯系沃特世化學消耗品部門尋求支持，使用合適的濃度與進樣量。柱效結果略低于柱效測試報告屬正常情況。如結果明顯偏低、峰形拖尾，提示色譜柱和/或所使用的液相系統處于非理想狀態，需要進行故障排查。

柱清洗與再生的*步驟：

壓力升高，色譜柱峰形發生變化如出現嚴重拖尾、肩峰甚至峰分岔，分離度降低，這些都強烈提示色譜柱受到污染?？刹捎靡韵虏襟E處理：

1. 如系統接有在線過濾器和保護柱，首先排查在線過濾器與保護柱，進行更新替換。日常操作中，當壓力升高10%或柱效降低10%時，就應考慮更換在線過濾器和/或保護柱。
2. 使用高比例的有機溶劑進行沖洗（請注意避免鹽析出，通?？墒褂锰荻壬叻?，然后維持在高比例甚至*有機溶劑條件下）。此操作通?？上慈ゴ蟛糠治廴疚?。
3. 如有機溶劑清洗不能解決問題，可采用如下方法進行色譜柱的清洗和再生。根據樣品性質以及你所了解的污染物性質選擇清洗方法，用20倍柱體積（即，對于4.6x250 mm柱，相當于80 mL）的HPLC級溶劑清洗色譜柱，將流動相溫度升至35-55?C可提高清洗效率。（注：該說明摘選自waters產品目錄2017-2018版本81頁）

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