詳細介紹
KOD -Plus-系列酶(TOYOBO)KOD-201
特征1. 優良的保真性 | |
KOD -Plus-系列的酶具有強力3'→5'核酸外切酶活性(Proof-reading活性),相比KOD DNA polymerase,保真性更高,約為Taq DNA polymerase的80倍。zui適用于克隆。 |
特征2. 通過熱啟動提高了PCR反應效率
通過將2種抗KOD單克隆抗體預混在酶中,抑制了PCR反應前常溫狀態下的多聚酶活性和
3'→5'核酸外切酶活性(該活性是產生非特異性反應的主要原因)。抗體在PCR的zui初變
性步驟即發生失活,對擴增反應沒有任何影響。
特征3. 延伸性?擴增效率的提高
對反應Buffer的組成進行了*化的重組,使之較以往的KOD DNA polymerase延伸性?擴
增效率均有很大的提高。
特征4. 超群的耐熱性
因其耐熱性比Taq DNA Polymerase更為優良,故可以將熱變性步驟的溫度設定值提高,對
GC-rich等容易形成高級結構的目的片段尤其適用。
特征5. 高PCR成功率【KOD -Plus- Ver.2】
對難擴增的目的片段、長目的片段的PCR成功率比KOD -plus-更高。另外,也降低了帶入的
逆轉錄反應液對PCR反應的抑制。
<幾點建議>
●PCR產物的克隆
由于本酶的PCR產物已被平滑化,可用平滑末端克隆法進行克隆。此時,如已對載體進行了脫磷酸化處理,就需要對PCR產物進行磷酸化,或使用帶5'磷酸基的引物。 另外,由于本酶的PCR產物已被平滑化,不能直接進行TA克隆。可使用按以下方法開發的TA克隆試劑盒「TArget Clone -Plus-」。
●PCR條件的設定 品名 包裝 保存溫度 Code No. 價格 KOD -Plus- 200U×1 -20℃ KOD-201 RMB 800 (200U×1)×5 -20℃ KOD-201B RMB 3700 200U×1 -20℃ KOD-211 RMB 1000 (200U×1)×5 -20℃ KOD-211B RMB 4600 定點突變導入試劑盒 20次 -20℃ SMK-101 RMB 1500 KOD用TA克隆試劑盒 10次 -20℃ TAK-201 RMB 380 KOD -Plus-用Buffer 1ml -20℃ KOD-2B RMB 50 KOD -Plus-用MgSO4 1ml -20℃ KOD-2S RMB 50 KOD -Plus- Ver.2用Buffer 1ml -20℃ KOD-3B RMB 50
酶的標準使用量為50μl反應體系1U。延伸反應在68℃條件下進行,按1kb目的片段1min.的標準。出現拖尾條帶時,可降低MgSO4濃度,無法確認到擴增時,可提高MgSO4濃度。
●GC-rich模板的情況
在反應液中添加終濃度為2?5%的DMSO可得到改善。
●以RT反應液為模板的情況
過量帶入RT反應液有可能會對PCR反應產生抑制作用。建議帶入到PCR的RT反應液在PCR反應液的1/25以下(在1/50以下)。這樣就無需考慮RT反應液中Mg2+、dNTPs的影響,只要按照基本反應條件添加本酶中添付的dNTPs和MgSO4即可。
相關產品價格表 KOD -Plus- Ver.2
品名 包裝 保存溫度 Code No. 價格
KOD -Plus- Mutagenesis Kit
TArget Clone-Plus-