詳細介紹
碧云天生產的顯色法TUNEL細胞凋亡檢測試劑盒(Colorimetric TUNEL Apoptosis Assay Kit)為您提供了一種高靈敏度又快速簡便的細胞凋亡檢測方法。對于待檢測的細胞或組織樣品,經過*標記和后續的DAB顯色等步驟,即可在普通光學顯微鏡下觀察到凋亡細胞。
細胞在發生凋亡時,會激活一些DNA內切酶,這些內切酶會切斷核小體間的基因組DNA。細胞凋亡時抽提DNA進行電泳檢測,可以發現180-200bp的DNA ladder。基因組DNA斷裂時,暴露的3'-OH可以在末端脫氧核苷酸轉移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase,TdT)的催化下加上*(Biotin)標記的dUTP(Biotin-dUTP),隨后和辣根過氧化物酶(HRP)標記的Streptavidin (Streptavidin-HRP)結合,zui后在HRP的催化下通過DAB顯色來顯示凋亡細胞,從而可以通過普通光學顯微鏡檢測到凋亡的細胞,這就是本試劑盒通過TUNEL(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)法檢測細胞凋亡的原理。
本試劑盒有如下優點。(1)高靈敏度:可以在單細胞水平檢測到細胞凋亡,同時由于凋亡早期就有DNA斷裂,可以檢測到早期的細胞凋亡。(2)特異性好:TUNEL檢測時通常更容易標記凋亡細胞,而不容易標記壞死細胞。(3)快速:僅需約2-3個小時即可完成。(4)應用范圍廣:可以用于檢測冷凍或石蠟切片中的細胞凋亡情況,也可以檢測培養的貼壁細胞或懸浮細胞的凋亡情況。
TUNEL法特異性檢測細胞凋亡時產生的DNA斷裂,但不會檢測出射線等誘導的DNA斷裂(和細胞凋亡時的斷裂方式不同)。這樣一方面可以把凋亡和壞死區分開,另一方面也不會把射線等誘導發生DNA斷裂的非凋亡細胞判斷為凋亡細胞。
極少數細胞凋亡時沒有DNA斷裂,此時不適用TUNEL法檢測。在個別類型的壞死細胞中也發現TUNEL檢測呈陽性。在需要嚴格判斷細胞凋亡的情況下,同時檢測多個凋亡指標。
本試劑盒足夠檢測20個樣品。
包裝清單:
產品編號 | 產品名稱 | 包裝 |
C1091-1 | TdT酶 | 40μl |
C1091-2 | Biotin-dUTP | 960μl |
C1091-3 | TdT酶稀釋液(選用) | 500μl |
C1091-4 | Streptavidin-HRP | 22μl |
C1091-5 | Streptavidin-HRP稀釋液 | 1ml |
C1091-6 | DAB顯色液A | 6ml |
C1091-7 | DAB顯色液B | 6ml |
C1091-8 | 標記反應終止液 | 6ml |
— | 說明書 | 1份 |
保存條件:
-20℃保存。DAB顯色液A和DAB顯色液B需避光保存。
注意事項:
需自備用于洗滌細胞的PBS或HBSS,用于封片的抗熒光淬滅封片液(P0126)等適當的封片液,用于固定的4%多聚甲醛或向碧云天訂購免疫染色固定液(P0098),同時需自備含0.1% Triton X-100的PBS或向碧云天訂購免疫染色洗滌液(P0106)。 需自備過氧化氫,除石蠟切片外需自備甲醇。
如果用于石蠟切片的檢測,需自備蛋白酶K和二甲苯。蛋白酶K(ST533)可以向碧云天訂購。
為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。