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單細胞分離的特點應用以及小技巧
閱讀：77 發布時間：2021-9-6
單細胞分離采用類似噴墨打印機以及一次性分配分離槽，溫和高效地接種單細胞，使用明場高分辨率成像或可選熒光分選細胞，每個單細胞分離捕獲 5張圖像，單克隆性，提高工作效率，保持并增強細胞活率，且防止交叉污染。
采集單細胞分離的證據，在接種細胞時記錄5張連續圖像，以96或384孔板的形式提供直接的單克隆性圖像證據，提高克隆形成率，與傳統方法相比，在克隆形成率上可實現高達8倍的提升。
保持細胞健康和無菌，正如克隆生長實驗所見，通過溫和的分離維持細胞活性，并使用無菌的一次性單向分離槽防止交叉污染，簡便、快速、可選擇以及無損分離單細胞，簡化遺傳和克隆培養、分析中分離過程。快速高效接種單個活細胞至微孔板分離系統的主要功能為高效柔和地分離或分選活的單細胞。該系統通過微流控技術柔和地形成細胞液滴，同時利用白光和熒光成像實時分析細胞數量和熒光強度，將符合要求的單細胞液滴準確接種至96孔板。
主要特點
1.分離效率>85%，單細胞活率>75%；
2.記錄分離前后的連續5張圖像，用于支持細胞株的單克隆性；
3.采用一次性分離槽，省卻系統的清洗驗證，減小交叉污染的風險；
4.采用白光成像和熒光成像，可根據細胞直徑、圓度以及熒光強度篩選出感興趣的細胞；
5.內置除靜電裝置，消除微孔板靜電，確保細胞液滴接種至微孔正中間，尤其是PCR板。
單細胞分離系統可代替傳統的有限稀釋法，高效地將單個活細胞接種至微孔板中。得益于分離系統的高效率和高活率，可以將每塊微孔板中可獲得的單克隆細胞團提高至多8塊，從而在相同的工作量下可篩選更多的細胞克隆，從中發現更多更優質的細胞株。分離過程中記錄的連續5張圖像，可以與后續的孔板成像的圖像證據互相補充，從而提高單克隆性的可信度。
應用范圍：連接不同管徑大小的毛細玻璃針，可分離捕獲各種非貼壁狀態的單細胞和微粒等，如細菌、酵母、藻類細胞、植物花粉、原生動物單細胞、懸浮細胞、血液細胞、免疫細胞、卵細胞、各種懸液中單細胞及特殊標記的單細胞等。
單細胞分離的小技巧
1. 縮短制備單細胞懸液的時間，以保留細胞活力
2. 考慮使用細胞篩來過濾出細胞團塊或雙細胞
3. 注意緩沖液的選擇，包括分選和收集溶液
4. 如果您打算在分選后培養細胞，請使用對數生長期的細胞，并確定最佳培養條件
5. 在分選轉染后的細胞時，通常在轉染后72小時進行，以提高細胞群的生存能力
6. 如果采用熒光抗體來分離稀有細胞，請在染色前離心抗體，以便去除任何可能被誤認為是靶細胞的熒光顆粒
7. 對于單細胞基因組學應用，在分選后別忘了離心平板，以確保細胞在孔的底部
8. 選擇一種可靠的分析技術來評估分選細胞的數量和質量