国产91在线|亚洲/米奇精品一区二区三区在线观看/亚洲国产精品一区二区九九/五月婷婷基地

產品展廳收藏該商鋪

您好 登錄 注冊

當前位置:
上海古朵生物科技有限公司>公司動態>膠回收和PCR產物回收技巧

公司動態

膠回收和PCR產物回收技巧

閱讀:32          發布時間:2021-8-6

1.提高膠回收量的技巧

1)增加電泳時的上樣量。

2) 電泳緩沖液用新鮮配制的。

3) 切膠時盡量只切有條帶的膠,減小切膠體積:含目的片斷很少的膠就不要要了,不然影響回收率。

4) 把切的兩塊或多塊膠融化后,無論多大的體積都用一個管子,轉移到同一個柱子上。

5) 溶膠時所加的溶液可多一點,這樣更有利于DNA與膜的結合,不過一般不要多余750ul。

6) 膠回收的關鍵是通過柱子的溶液的鹽濃度、酸堿性(電荷)和疏水性使DNA與柱子結合,因此,若電泳緩沖液的PH偏高,可在溶膠液中加入10ul(PH 5.0,3mol/L的 NaAC);為了使DNA分子 更好 的攔截在膜上,可以添加30%異丙醇在加熱溶解膠后的液體里。

7) 加洗脫液之前,將柱子在室溫放置幾分鐘(大約需10分鐘),以使乙醇充分揮發。

8)最后少加些洗脫液,盡量減少回收體積,一般用30-50μl洗脫液洗脫(不能太少,否則無法浸濕膜反而不利于洗脫);洗脫液滴在膜中央,以充分洗脫結合在 膜上的DNA。

9) 可以在加入洗脫液之后,可以在55度水浴5分鐘或放在50度水浴10分鐘以上再洗脫,或用封口膜密封4度過夜,第二天再離心回收,效果不錯。

10)將離心后的洗脫液加回吸附柱,再次離心。

2. PCR 產物回收的詳細方法和步驟

1)普通膠回收

如果要膠回收,最好還是用試劑盒,方便,回收率也略高,實在要手工回收,可以切膠后加入3倍體積TE,水浴熔化后,酚、酚/氯仿抽提干凈,乙醇沉淀 即可。

2)從低熔點凝膠回收DNA

純化DNA片段 加與凝膠體積相等的TE(10mmol/l Tris-HCl pH8.0,0.1mmol/l EDTA ),置65℃水浴5分鐘保溫,使凝膠*溶解。待放至室溫,加等量酚(TE飽和,TE封在上層,取下層酚),輕輕混勻(不用混 勻),12000rpm,3分鐘離心。反復1-2次。取上層液,加0.1體積3mol/L醋酸鈉(pH5.2)和2.5倍體積無水乙醇,進行乙醇沉淀。將 純化的DNA加適量TE溶解,測定含量,備用(可用于目的基因結構分析,探針 制備等)。

3)擴增特異性好的PCR回收

如果PCR擴增特異性好,只是簡單的PCR產物純化回收,可以在PCR產物中加入50ug/ml 的蛋白酶K,37度1h,酚/氯仿抽提一次,氯仿抽提一次,上清加入0.1體積的醋酸鈉,2.5體積的無水乙醇沉淀回收。

收藏該商鋪

登錄 后再收藏

提示

您的留言已提交成功!我們將在第一時間回復您~
二維碼 意見反饋

掃一掃訪問手機商鋪
在線留言