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免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎的用于研究蛋白質相互作用的經典方法。是確定兩種蛋白質在完整細胞內生-理性相互作用的有效方法。那么免疫共沉淀實驗的注意事項有哪些呢？古朵生物為您介紹一下：

1、細胞裂解采用溫和的裂解條件，不能破壞細胞內存在的所有蛋白質－蛋白質相互作用，多采用非離子變性劑（NP40 或 Triton X-100）。每種細胞的裂解條件是不一樣的，通過經驗確定。不能用高濃度的變性劑（0.2％ SDS），細胞裂解液中要加各種酶抑制劑，如商品化的 cocktailer。

2、使用明確的抗體，可以將幾種抗體共同使用。

3、使用對照抗體：

① 單克隆抗體：正常小鼠的 IgG 或另一類單抗

② 兔多克隆抗體：正常兔 IgG

4、在免疫共沉淀實驗中要保證實驗結果的真實性，應注意以下幾點：

① 確保共沉淀的蛋白是由所加入的抗體沉淀得到的，而并非外源非特異蛋白，單克隆抗體的使用有助于避免污染的發生。

② 要確?？贵w的特異性，即在不表達抗原的細胞溶解物中添加抗體后不會引起共沉淀。

③ 確定蛋白間的相互作用是發生在細胞中，而不是由于細胞的溶解才發生的，這需要進行蛋白質的定位來確定。