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蛋白質組學鑒定技術流程 @古朵生物
閱讀:150 發布時間:2021-4-15蛋白質組(Proteome)的概念,蕞早由澳大利亞Macquarie大學的Wilkins和Williams于1994年首先提出的,是指一個基因組(Genome),或一個細胞、組織表達的所有蛋白質。
蛋白質組學(Proteomics)以細胞、組織或生物體全體蛋白質為研究對象,通過高通量的色譜質譜聯用技術檢測樣品所有蛋白質及其變化規律,包括蛋白質的表達水平,翻譯后的修飾,蛋白與蛋白相互作用等,利用生物信息技術從整體的角度獲得蛋白質水平上的關于疾病發生,細胞代謝等過程的變化,闡明生-理或病理條件下的變化機制。
蛋白質全譜和混合蛋白鑒定分析指的是對完整的組織、體液或其提取物混合蛋白的組分進行分析,目的在于鑒定出盡可能多的肽段和蛋白質分子。針對單一蛋白的鑒定,如考染及銀染的純化蛋白(不含戊2醛,戊2醛會與蛋白質發生不可逆交聯,嚴重影響質譜結果),對膠點或目的條帶進行鑒定。針對混合蛋白樣本,可以收集其蛋白溶液及泳道等,利用高效液相色譜-質譜聯用( HPLC-MS/MS )技術,完成對樣本的定性分析。
蛋白質組學鑒定流程
(1)樣本中蛋白質的提取與質控(是否能染色;條帶清晰;目的條帶準確);
(2)蛋白樣品酶解成肽段;
(3)肽段進入液相質譜聯用儀,先在液相中預分離;再進入質譜;
(4)經過質譜質量分析器檢測器得到譜圖;
(5)譜圖信息經過數據庫比對,得到肽段和蛋白的信息;
(6)生成樣品鑒定結果。