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細胞培養所有過程及常見問題

細胞培養是科研入門基礎實驗，必須掌握。對于已經掌握了的人來說，細胞培養很簡單；然而對于還沒有入門的人來說，不知所言。對于實驗小白來說首先要了解細胞來源，哪里購買細胞株，細胞培養的相關設備，細胞培養試劑的使用與選擇等；而對于老司機來說，需要知道如何鑒定細胞污染以及如何處理細胞濡染，如何選擇合適的血清和培養基，消化細胞*的選擇以及用量等等常見問題。

先談談自己細胞培養過程的一些經驗。

1.細胞株的購買：細胞株到正規的公司購買，如ATCC，中科院細胞庫（北京，上海，武漢等地都要細胞庫）。zui主要的是現在很多雜志發表文章，要求提供細胞鑒定書，所以購買細胞的時候一定要問清楚是否會提供細胞鑒定書。

2.培養基及血清選擇：選擇進口的，尤其是比較難養的細胞，更需要進口試劑培養。國產試劑對于有些細胞也可以使用，但是大部分國產試劑純度沒有進口的好。血清強烈建議使用進口血清，血清是細胞營養的重要部分，很多細胞養不活就是血清不好。不要貪便宜買不正規的血清，一分錢一分貨。我們搞科研要得到可靠的結果，首先就要保證培養過程沒有問題，不要因為經費緊張去省錢買不好的血清，因為血清不好導致實驗做不好實在是沒有必要，浪費時間又沒做出結果。

3.細胞消化：加入*消化細胞覆蓋細胞即可，沒必要加過多*，浪費資源。25cm^2培養瓶中加500ul足夠了，甚至更少。很多新手擔心消化不下來，加入大量*，實在是沒有必要。

4.消化后離心：消化后是否需要離心？對于剛剛復蘇的細胞，復蘇過程需要離心去除細胞凍存保護劑DMSO等，DMSO在低溫可保護細胞，但是在常溫確有毒性，會損傷細胞生長。復蘇的細胞傳*、二代時需要離心，把*和壞死細胞去掉。等細胞傳代穩定后，通過優勝劣汰，存活下來的細胞都是質量比較高了，那么在以后傳代過程可以不用每次都離心，加入*消化后，觀察到細胞開始從培養瓶壁脫落下來，就把*吸出來，加入*培養基終止消化，這個被終止消化的細胞懸液可以直接用于傳代，不要離心。因為離心也是一把雙劍，離心在去除*的同時，也會損傷細胞。當然間隔幾次傳代后，終止消化的細胞懸液定期離心，因為一直不離心也不太好。總之掌握一個度吧。

5.細胞凍存：對于腫瘤細胞，因為其生長能力比較強，可以采用加入1ml凍存液，按照 7：2：1或者5：4：1配置凍存液。即7份*培養基：2份血清：1份DMSO或者即5份*培養基：4份血清：1份DMSO。對于其他細胞株按照以上比例凍存也可以，按照9：1配置，即9份血清：1份DMSO。一小瓶可以凍存一管細胞。

6.污染的細胞處理：建議扔掉，包括近期用于細胞培養配置的所以培養基。污染的細胞要拯救過來，挺麻煩的，何況污染后細胞性質可能就變了。至于如何拯救污染的細胞，