液相色譜儀(HPLC)現已成為有機化學分析的重要手段之一。同樣,在食品分析中,無論是殘留分析還是成分分析,HPLC也已成為*的分析儀器。和其它分析儀器一樣,你若想讓HPLC很好地為你工作、得到可靠的數據,首先你要保養好它,使它處于一個良好的待機狀態,這樣你操作它進行分析時就可以比較順利地獲得理想的結果。而且良好規范的操作習慣可以延長儀器使用壽命。大家在學校或接受儀器公司培訓的時候,老師或工程師會提出很多的操作注意事項。但要是總結歸納一下,zui重要的有三點:脫氣、過濾和沖洗。本文圍繞這三點進行討論,給新從事HPLC分析的工作者一點操作建議,希望能對正確的操作儀器有一點幫助。更歡迎有經驗的專家介紹使用經驗,提出好建議。
一、脫氣
流動相脫氣對于避免HPLC系統出問題,順利得到理想數據是個很有效的措施。有些泵設計可以很好地排除氣泡,而也有一些泵設計當氣泡存在時將停止運轉。當一個氣泡通過*時,由于系統壓力大,氣泡通常會溶解在流動相溶液中,隨流動相通過柱子。但是到達檢測器流通池時系統壓力又恢復到了大氣壓,因而氣泡可能在檢測器流通池中又顯現,在色譜圖上會出現不規律的毛刺。為解決這個問題,有些儀器公司設計一個反壓控制器,這樣可以在檢測器出口提供足夠的壓力保持氣泡始終溶解在流動相中直到它們流出檢測器。當然,這個壓力不能超過流通池所能承受的壓力極限,否則可能損壞檢測器。必須注意,消除流動相中的空氣,并且還應避免空氣由管路(如PTFE管)滲透進流動相中。如果適當地關注在使用之前脫去流動相中溶解進的空氣,上述這些問題均能避免,或把影響降至zui低。
常用的脫氣方法有: 1. 在線脫氣法。現在商品的HPLC儀器,均可配在線脫氣機。在線脫氣使用簡單,低故障,有效。建議購買儀器時問清是否作為選購件。 2. 加熱回流法。此法的脫氣效果較好。在操作時要注意冷凝塔的冷卻效率。 3. 吹氦脫氣法。利用氦氣在液體中溶解度比空氣低的特性,可以很有效地從流動相中排除溶解的空氣。采用一個分布式噴射流裝置,一體積的氦氣可從流動相中將等體積的幾乎全部氣體排除。這種脫氣方法雖然好,但我們國內氦氣價格較高,很少有實驗室采用此方法。 4. 抽真空脫氣法。此法可使用真空泵,降壓至0.05~0.07MPa即可除去溶解的氣體,但多用于單溶劑體系的簡單分析。 5. 超聲波脫氣法。將欲脫氣的流動相置于*中,用超聲波震蕩10~20min。此法的脫氣效果zui差,但卻較為普遍。